上海科技大学转基因动物平台旨在为科研提供基因工程动物模型制备与动物品系资源保种等技术服务及培训,为学校及校外科研单位提供技术支撑。同时也会根据学校不同实验室的特殊需要,研发新的技术与方法用于动物疾病模型的建立。在做好服务的同时,本平台将关注生物医药与实验动物前沿技术,不断学习与研究新的技术与方法,提高试验成功率,优化平台管理与服务水平。

下面列出试运行期间技术服务内容,后面将根据实际需求情况作进一步扩充和调整。欢迎有需求的课题组联系我们开展相关试验。

联系人:俞慧清;邮箱:yuhq@@shanghaitech.edu.cn;电话:20684557

一、平台主要仪器

仪器名称

品牌

型号

存放地点

显微注射仪1

Olympus + eppendorf

IX83

14号楼4

显微注射仪2

Olympus + eppendorf

IX73

14号楼4

显微注射仪3

Olympus

IX73

14号楼4

拉针仪

Sutter

P-1000

14号楼4

锻针仪

Narigihe

MF900

14号楼4

磨针仪

Narigihe

EG401

14号楼4

到置荧光显微镜

LEICA

DMI8

14号楼4

体式显微镜

NIKON

SMZ1270

14号楼45

体式显微镜

LEICA

SAPO

14号楼45

融合仪

BTX

ECM2001

14号楼4

电转仪

BEX

CUY21ERITII

14号楼4

凝胶成像

Azure

C150

14号楼4

化学发光成像仪

GE

 

  

AI680

14号楼4

PCR

Life

Proflex

14号楼4

分光光度计

Thermo Fisher

NanodropONEC


  

14号楼4

离心机

EPPENDORF

5810R

14号楼4

酶标仪

TECAN

Spark

14号楼4

 

 


















二、平台技术服务及技术培训

1.小鼠种质保存与复苏、生物净化

序号

服务项目

成功标准

1

小鼠生物净化

±8

2

小鼠扩繁

≥30

3

小鼠胚胎冻存

±300

4

小鼠胚胎复苏

±8

5

小鼠精子冻存

±20

6

小鼠精子复苏

±8





1.1小鼠净化说明

1)   常规体外受精(IVF)净化,请提供公鼠≥1只,平台提供B6ICR等品系母鼠用于取卵。公鼠须健康状况良好,有交配生育经验,3-6月龄为宜。

2)   自然配种净化,请提供公鼠≥2只,母鼠≥5只。公鼠3-6月龄,母鼠3-4周龄为宜。

3)   对出生幼鼠数量有额外要求的,请务必标注清楚或提前告知。

1.2小鼠扩繁说明

1)   IVF扩繁,请提供公鼠≥1只,平台提供B6ICR等品系母鼠用于取卵。公鼠须健康状况良好,有交配生育经验,年龄3-6月龄为宜。

2)   若用以扩繁的公鼠只剩1只,建议同时冻精。

3)   对幼鼠数量有额外要求的,请务必标注清楚或提前告知。

1.3 小鼠胚胎冻存注意事项

1)   小鼠胚胎冻存有两种获取受精卵的方式:自然交配和IVF取卵,冻存约300枚胚胎。

2)   自然交配取卵:要求每品系公鼠数量≥4只;母鼠≥15只。该方法耗时,同时产生较多的饲养费用,但复苏效率高。如需获得纯合子或多基因后代,公母鼠皆为纯合子或多基因,公鼠3-6月龄,母鼠3-4周龄为宜。

3)   IVF取卵:要求每品系公鼠≥2只,与野生型B6或其他品系母鼠卵子体外受精,B6母鼠由平台提供; 若需获得纯合子或多基因后代,需提供公鼠≥2只,母鼠≥15只,公母鼠皆为纯合子或多基因,公鼠3-6月龄,母鼠3-4周龄为宜。

1.4 小鼠精子冻存注意事项

提供公鼠≥2只,公鼠3-6月龄为宜,有交配生育经验(大于6月龄的老龄公鼠可以尝试做)。每冻一次牺牲2只公鼠,共存20杆麦杆。精子冻存效果按1-5分评价,低于3分会再复冻一次。

1.5 小鼠胚胎复苏注意事项

1)   申请冻胚复苏,复苏完成后是否补充冻存量,请自行决定且及时告知平台。

2)   外来胚胎复苏,需提供保存在液氮中的胚胎,并提供复苏方法及复苏液。

1.6 小鼠精子复苏注意事项

1)   申请冻精复苏,复苏完成后是否补充冻存量,请自行决定且及时告知平台。

2)   外来精子复苏,一般需提供保存在液氮中的精子,并提供复苏方法。

2.小鼠不孕不育辅助生殖

序号

问题

方法

适用年龄

1

非性成熟小鼠雄鼠死亡

圆精注射

22日龄-8

2

弱精,少精,死精

单精注射

8周及以上

3

性成熟雄鼠不育或突然死亡

体外受精

8周及以上

4

雌鼠不孕或突然死亡

卵巢移植

10日龄及以上

3.显微注射相关

序号

服务项目

备注

1

显微液射仪使用

操作人员需有相关经验

2

卵细胞注射

自备注射用核酸或蛋白

3

受精卵注射

自备注射用核酸或蛋白,培养至囊胚

4

注射后胚胎移植

自行进行显微注射,平台协助进行受体移植

5

显微注射+胚胎移植

自备核酸或蛋白,注射后移植,获得后代

6

囊胚注射+胚胎移植

自备ES细胞,注射后移植,获得后代

7

单精注射+胚胎移植

针对不育小鼠或个性化需求






 

说明:

3.1申请独立使用操作显微注射仪者需有熟练的胚胎操作经验、熟悉仪器使用相关流程及注意事项。

3.2申请胚胎移植服务,请在移植小鼠出生后取回小鼠。

3.3申请受精卵显微注射+胚胎移植,平台提供其它所需实验材料及相关服务,待小鼠出生后取回。

3.4申请囊胚注射,请准备好注射用细胞,移植小鼠出生后取回。

3.5申请单精注射,请准备好供精小鼠,移植小鼠出生后取回。

 

4.基因工程小鼠制备

序呈

服务项目

特征

1

基因敲除(KO

片段直接敲除

2

条件性基因敲除(cKO

Cre等小鼠交配后,能实现特异组织或者全身性敲除

3

多用途条件基因KO-first敲除

Cre等工具鼠交配可得表达报告基因以及基因敲除小鼠

4

基因定位敲入(KI

敲入基因表达,内源性基因不

表达/敲入基因表达,内源性基因不表达/基因部分替换

5

随机插入Random   transgenesis

外源基因随机插入表达

6 

定位过表达(Site specific KI)

外源基因精确整合到小鼠

Rosa26/H11基因内

 

说明:

4.1基因工程小鼠制备因为所需修饰基因的不同,每个试验难度各异,请务必在试验前充分沟通,以达到最好的效果。

4.2 实验结束后提供基因修饰小鼠2只或以上,并附实验报告及后期繁育建议。

 


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